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配备Lattice SIM²的蔡司Elyra 7 超高分辨率活细胞成像系统
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型号:Elyra 7
品牌:蔡司
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规格:台
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  • 超高分辨率显微镜Elyra 7为您提供远超传统显微镜的衍射极限:使用Lattice SIM²,您可以使传统的SIM分辨率翻倍,辨析出超精细的亚细胞器结构,甚至是那些相距不超过60 nm的结构。当使用活体观察所需的最小曝光进行高速成像的时候,也不会影响分辨率。Elyra 7可以兼具超高分辨率和高动态成像——无需特殊的样品制备或复杂的显微技术专业知识。

    揭示充满活力的生命亚细胞网络:

    • 分辨小至60 nm的结构。
    • 以高达255 fps的速度观察活细胞动态。
    • 加速三维图像采集。
    • 在宽视场显微镜中获得超清晰的光学切面。

    • 在一个平台上整合多种成像技术。
    • Cos-7细胞的颜色编码投影,该细胞用α-微管蛋白抗体Alexa 488的免疫荧光标记。
      Cos-7细胞的颜色编码投影,该细胞用α-微管蛋白抗体Alexa 488的免疫荧光标记。

      使用Lattice SIM²获得更出色的分辨率

      图像重建算法SIM²可以将SIM技术提升到一个新的水平,让您能够将传统的SIM分辨率翻倍。Lattice SIM²具有出色的非焦平面光抑制能力,即使是高度散射的样品,也能在宽场显微镜下提供清晰的光学切面。针对活体和固定样品,SIM²都可以对采集到的数据进行可靠的数据重构,同时将伪迹最小化。

      为您提升实验速度和效率

      在实现传统SIM分辨率翻倍的同时,SIM²让您能以高达255 fps的速度对活体和固定样品进行低光毒性成像。SIM²与Burst、Leap模式相结合,可以更胜以往的速度进行超高分辨率采集。使用SIM Apotome模式,甚至可以实现几乎无损的图像采集,这意味着每次重建图像只需要一个原始图像!或者利用Elyra 7 Duolink同时对两个不同的染色结构进行成像,并使用多通道荧光进行超高分辨率成像。

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      Cos-7细胞中内质网(钙网蛋白-tdTomato)的时间序列成像呈现了高度活跃的结构变化。

      SMLM:非洲爪蟾A6细胞(肾上皮细胞)。
      SMLM:非洲爪蟾A6细胞(肾上皮细胞)。

      让研究更加灵活

      Elyra 7几乎可以处理所有类型的样品,包括对光毒性敏感的培养细胞、具有较强散射性的线虫,以及厚度不超过100 μm的植物或组织切片。Elyra 7集数种显微技术于一身,包括:LatticeSIM²、SIM² Apotome、宽场DIC、SMLM和TIRF。您可以任意使用这些技术(甚至全部用上)来采集图像,并将同一样品的图像关联起来,从而深化对于样品的认知。您甚至可以利用关联成像流程把Elyra 7与其它各种成像系统相结合,如配备Airyscan的LSM共聚焦显微镜或扫描电子显微镜。

      产品背后的科技

      Lattice SIM:3D超高分辨率活细胞成像

      Lattice SIM使用点阵模式的晶格状栅格(而非传统SIM中的网格线)来照射样品区域。这样,成像速度得到了大幅提高。此外,晶格模式还提供更高的对比度,从而更可靠地重建图像。由于晶格模式照明的采样效率是传统SIM的2倍,因此样品照明所需的激光剂量更少。这种晶格照明使得SIM成为了理想的活细胞成像技术。晶格照明的光子效率得到了大幅提升,这让您能够在提高成像速度的同时,也能获得更高的对比度和更低的光漂白。

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      SIM²:使您的SIM分辨率双倍提升

      Cos-7细胞用α-微管蛋白抗体Alexa fluor 488染色,使用基于广义维纳滤波器的传统SIM算法以及新型SIM²重建技术来处理其图像。
      Cos-7细胞用α-微管蛋白抗体Alexa fluor 488染色,使用基于广义维纳滤波器的传统SIM算法以及新型SIM²重建技术来处理其图像。上图显示,SIM²与SIM相比,分辨率得到了提高。物镜:Plan-Apochromat 63× / 1.4油镜。

      SIM²是一种突破性的新型图像重建算法,可提高结构照明显微镜数据的分辨率和光学切面质量。SIM²兼容Elyra 7的所有SIM成像模式,并完全集成在ZEN软件中。

      与传统重建算法不同,SIM²是一种双步图像重建算法。第一步,进行衍射级次合并,实现去噪和频率抑制滤波。所有这些数字图像操作所产生的效果都转化为数字SIM点扩散函数(PSF)。后续的迭代反卷积使用的正是PSF。与使用实验性PSF对基于硬件的显微数据反卷积的优势类似,SIM²算法在分辨率、光学切面和稳定性方面优于传统的单步图像重建法。

      对传统染色样品进行多色超高分辨率成像

      Lattice SIM²可以让您对传统染色样品进行精细至60 nm分辨率的多色成像。联会复合体由于体积小,以前只能使用复杂的方法(如三倍扩大样品的超高分辨率成像)才能对其进行三色成像。无需对样品进行特殊处理或染色,Lattice SIM²便可以分辨出远低于100 nm距离的SYCP3(侧生组分)和SYCP1-C(横向细丝的C-末端)两条线状。更重要的是,三色图像提供了关于SYCP3蛋白和SYCP1蛋白之间距离的结构信息。即使在SYCP1蛋白中,N-和C-末端两个标记之间不足50nm,也可以被清楚的分离。

      三倍标记的小鼠睾丸联会复合体结构
      通过使用SeTau647免疫标记SYCP3,使用Alexa 488免疫标记SYCP1-C,使用Alexa 568和Lattice SIM²模式免疫标记SYCP1-N,直观呈现三倍标记的小鼠睾丸联会复合体结构。

      我还记得看到首批结果的时候, 因为实在太兴奋了,所以我忍不住大笑起来。我接下来的反应便是向那些能立即受益的关键用户发送邮件。从组织神经生物学家,到细胞和分子免疫学家,再到酵母、细菌的研究人员,所有这些人都已通过SIM²受益匪浅。

       约克大学成像和细胞测量实验室主管Peter O‘Toole

      SIM Apotome:灵活的光学切面成像技术

      SIM Apotome
      当使用宽场显微镜进行活细胞成像时,常常会受到非焦平面模糊信号及背景信号的干扰, 从而降低图像的对比度和分辨率。Elyra 7提供SIM Apotome模式,利用结构光照明,提供高对比度及高分辨率(包括横向和轴向)的快速光学切面图像。

      SIM² Apotome
      SIM Apotome采集模式与SIM²重建算法相结合,让您可以对高对比度、高分辨率的快速活细胞成像进行进一步低光毒性调整。在以不同放大倍数获取大面积或大体积样品图像的同时,也可以使用更快的光学切面速度来提高工作效率。

      SIM² Apotome:对比Cos-7细胞的宽场和SIM² Apotome单平面图像,其中微管染色(α-微管蛋白抗体Alexa Fluor 488,绿色)和细胞核染色(Hoechst,蓝色)。物镜:LD LCI Plan-Apochromat 25× / 0.8 Imm Corr。

      拓展您的应用

      单分子定位显微技术

      分子级别分辨率的3D成像

      在单分子荧光定位显微技术 (SMLM) 中,可随机激活荧光分子,仅让众多分子中的一个处于激活状态。这使得您能够获得高于点扩散函数(PSF)衍射极限的定位精度。一旦被记录,分子将会变为暗态,然后重复激活与关闭的过程,直至所有分子被捕获。在一幅新图像中将绘制出定位信息,供您创建超高分辨率图像。您可以使用Elyra 7的SMLM技术(如PALMdSTORMPAINT),实现20 – 30 nm的横向分辨率。ZEN软件将对您的数据进行无缝图像重建。

      此外,Elyra 7还提供基于PRILM技术的3D SMLM模式。为了编码Z轴,PSF得到了重塑,于是在只采集一个平面的同时,您可以获得1.4 µm深度的体积信息(轴向分辨率为50 – 80 nm)。因此,您可以获得具有一致分子级别分辨率的完整细胞3D数据。

      BSC1(肾上皮细胞)线粒体膜的3D PAINT成像。
      BSC1(肾上皮细胞)线粒体膜的3D PAINT成像。

      Elyra 7 Duolink

      同步双色成像

      活体样品的研究常常聚焦于不同蛋白质或细胞器的相互作用。对相关结构同步成像是正确理解这些高速动态过程的关键。为您的Elyra 7配备Duolink适配器,以操作两台sCMOS相机,并充分利用宽场技术的所有优势:

      • 在整个观察视野内进行真正的双色同步成像——在图像中几乎没有任何延迟(例如在使用扫描技术时,或在不同通道进行持续数据采集期间,可能会发生的延迟)。
      • 选择低曝光时间,以获得整个活细胞的超高分辨率实时快照。
      • 相同时间内可获得双倍信息,以提高固定细胞实验的工作效率。
      • 使用双相机采集任何可能的颜色组合,而集成的多通荧光滤片组会将可能的串色风险极大降低。
      • 无需切换滤光片即可获得4色图像,让您的多色实验更加快捷。
      • 在两台sCMOS相机上进行多色SMLM实验
      Elyra 7 Duolink sCMOS相机适配器可用于双色同步采集
      Elyra 7 Duolink sCMOS相机适配器可用于双色同步采集,它使用集成的多带通发射滤光片,可实现高效图像采集。
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      Cos-7细胞表达了内质网标记物钙网蛋白-tdTomato(品红)和线粒体标记物Tomm20-mEmerald(绿色),同时进行了双色成像。视频展示了ER和线粒体的高动态相互作用。

      Burst模式

      以高达255 fps的速度进行超高分辨率成像

      只有当同时实现超高分辨率和高动态成像时,才能捕捉到细胞内小囊泡的扩散运动(特别是弹道运动)。通过对2D时间序列数据进行Burst处理,Elyra 7能够在大观察视野中以255 Hz的频率生成超高分辨率图像,甚至可以在Lattice SIM和SIM Apotome采集模式中同步采集双色图像。

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      U2OS细胞表达Rab5-mEmerald(绿色)和tdTomato标记的与高尔基体相关的转运标记物(洋红)。双色图像同步采集,曝光时间为1.5ms/相位,观察视野为1024 × 1024像素(64 μm × 64 μm)。

      Leap模式

      三维成像的数字切面,速度提高三倍

      Elyra 7 Leap模式将体积成像速度加快了三倍,同时降低了样品上的光漂白。Lattice SIM采集模式仍然可以采集所有细微细节,同时以38体积/分钟的速度对U2OS细胞(表达钙网蛋白-tdTomato)的整个体积(18张平面图像)进行成像。SIM Apotome采集模式可以将体积成像速度提高三倍。

    操作视频

    技术文档